การผลิตและกิจกรรมของรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสจาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM 109

การศึกษาการแสดงออกของยีนไฮยาลูโรนิเดส จาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM109 เมื่อใช้ pQE80-L vector system พบว่า มีขนาดของยีนประมาณ 2,400 คู่เบส โดยรีคอมบิแนนท์โปรตีนทำการตรวจสอบขนาดโมเลกุลด้วยเทคนิค SDS-PAGE พบว่าในสารละลายเซลล์มีขนาดโมเลกุลประมาณ 88 กิโลดาลตัน โดยเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสที่แยกได้จากสารละลายตะกอนเซลล์ ถูกตรวจวัดได้ในระดับที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์จาก supernatant เมื่อทำการศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อการเลี้ยงของการผลิตเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสโดยเชื้อสายพันธุ์นี้ในระดับขวดเขย่า พบว่า สภาวะที่เหมาะสมต่อการเพาะเลี้ยงเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ 2xYT ที่มีปริมาตรของอาหารเลี้ยงเชื้อต่อปริมาตรขวดเขย่า 40 เปอร์เซ็นต์ คือ ที่อุณหภูมิ.35 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 8 และ 200 รอบการเขย่าต่อนาที สารละลายเอนไซม์ที่ไม่ทำให้บริสุทธิ์ แสดงค่ากิจกรรมสูงสุดในช่วงอุณหภูมิ 35.ถึง.40 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 การศึกษาจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์ที่สภาวะค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 และอุณหภูมิ.37 องศาเซลเซียส ด้วยวิธี Morgan-Elson colourimetric assay พบว่า Km และ Vmax มีค่าเท่ากับ 0.78 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และ 9.3 มิลลิยูนิตต่อมิลลิลิตร จาก Lineweaver–Burk plot