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赵, 小莹

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通过双gRNA进行可预测的高效基因编辑 (Version: 1.0)

CRISPR基因编辑是通过使用内源DNA修复机制修复Cas9引入的双链断裂(DSB)来完成的。尽管对于给定的CRISPR指导RNA(gRNA),DSB修复的结果是可预测的,但在不同的靶位点之间它是不同的。在这里,我们报道了由Cas9和一对gRNA引入的缺失连接是可预测的发现。我们研究了在三个人类细胞系中靶向四基因(TTR,CREB1,STAT2和IRF9)的8对gRNA的修复连接。使用Sanger和二代测序和ICE分析,我们发现缺失连接主要由非同源平末端连接(NHBEJ)修复。我们进一步评估了24个CRISPR缺失接头的插入缺失谱,以证实这一观察结果,并进一步证明了CRISPR对之间的PAM方向和距离对NHBEJ结果有轻微影响。基于这些观察结果,我们应用NHBEJ策略引入了高度精确且可预测的基因敲除和DMD外显子51的框内缺失,为杜兴氏肌营养不良症和许多其他人类疾病的CRISPR基因治疗提供了一种新颖的替代治疗策略。

Authors

  • 赵, 小莹
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10.26036/cnp00012032020